Lieviti dell'uva

Durata: 

1 h preparazione del terreno, 1 ora sterilizzazione, ½ ora semina, 3 giorni incubazione, 15' osservazione (+ tempo per eventuali vetrini)

Scopo:

Isolare e osservare i lieviti presenti sulla buccia dell'uva.

Materiale:

• Uva
  
• Per il terreno (15 mL per piastra):
  
  • Estratto di lievito 10 g
    
  • Glucosio 20 g
    
  • Peptone 20 g
    
  • Agar 15 g
    
  • Acqua distillata 1000 mL
    

Strumenti:

• Per il terreno:
  

• Flacone con tappo a vite
  
• Cilindro graduato
  
• Bacchetta di vetro
  
• Vetrini da orologio
  
• Spatole
  
• Piastra riscaldante
  
• Bilancia tecnica
  
• Autoclave
  
• Contenitore autoclavabile
  
• Pestello
  
• Piastre Petri
  
• Ansa
  
• Becco Bunsen
  
• Cappa a flusso laminare
  
• Termostato
  

Procedimento:

1. Preparazione del terreno
   
   1. Pesare l'estratto di lievito, il glucosio, il peptone e l'agar e metterli nel flacone con tappo a vite
      
   2. Aggiungere l'acqua distillata
      
   3. Portare a ebollizione su piastra riscaldante, mescolando
      
   4. Sterilizzare in autoclave a 121° C per 15', tenento il tappo non completamente chiuso, insieme ad un contenitore e un pestello
      
2. Preparazione delle piastre (lavorare sterilmente vicino a un Bunsen o sotto cappa a flusso laminare)
   
   1. Preparare le piastre col coperchio verso l'alto vicino al Bunsen, e il flacone di terreno ancora liquido ma che non scotti.
      
   2. Tenere il flacone con la mano destra, aprire il tappo (che va tenuto in mano, a seconda di come uno è più comodo tra il pollice e l'indice della mano destra o sinistra) e flambare l'imboccatura del flacone.
      
   3. Aprire parzialmente la prima piastra, versarvi il terreno fino a coprirne ¾ circa, richiudere la piastra.
      
   4. Stendere uniformemente il terreno nella piastra muovendola a 8 sul piano di lavoro.
      
   5. Lasciarla raffreddare col coperchio semiaperto vicino al Bunsen (o sotto cappa a flusso laminare)
      
   6. Ripetere i punti da 3 a 5 per tutte le piastre.
      
   7. Una volta che si sono raffreddate e non presentano più condensa, richiudere i coperchi.
      
3. Semina (lavorare sterilmente vicino a un Bunsen o sotto cappa a flusso laminare)
   
   1. Pestare l'uva nel contenitore sterile con il pestello
      
   2. Preparare le piastre col terreno capovolte
      
   3. Sterilizzare l'ansa nella fiamma, attendere 15' che si raffreddi
      
   4. Prelevare con l'ansa una piccola porzione del mosto pestato
      
   5. Sollevare con la mano sinistra il fondo di una piastra.
      
   6. Strisciare l'ansa sul terreno, senza scavarlo.
      
   7. Richiudere la piastra.
      
   8. Ripetere i punti da 2 a 6 per tutte le piastre, infine sterilizzare l'ansa nella fiamma.
      
   9. Scrivere sul bordo del coperchio delle piastre il cognome, la classe, il contenuto (striscio da uva), il terreno e la data di semina.
      
4. Incubare a 25° per 3 giorni
   
5. Osservare a occhio nudo, allo stereomicroscopio o al microscopio preparando vetrini.
   
6. Sterilizzare le piastre usate in autoclave a 121 °C per 15', usando un sacchetto da autoclave.
   

Risultato:

Dovrebbero crescere colonie emisferiche, bianche, lucide e cremose di lievito. Un lievito comune è Hanseniaspora uvarum (= Kloechera apiculata), con le cellule a forma di “limone”, cioè con due apici agli estremi della cellula.

Hanseniaspora uvarum isolata dall'uva (obiettivo 40x, oculare 10x)